二氧化碳培養(yǎng)箱的常見污染及防控措施
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二氧化碳培養(yǎng)箱的常見污染及防控措施
二氧化碳培養(yǎng)箱用途廣泛，主要用來培養(yǎng)細(xì)胞、組織和某些特殊微生物，為它們提供一個(gè)良好的體外培養(yǎng)環(huán)境，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)、微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、組織學(xué)實(shí)驗(yàn)以及分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。因此，二氧化碳培養(yǎng)箱的清潔維護(hù)尤為重要。
二氧化碳培養(yǎng)箱的常見污染
進(jìn)入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)環(huán)境中，對(duì)細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物都應(yīng)視為污染。不同的污染物對(duì)細(xì)胞的影響也有差別，有的影響是長期、緩慢和潛在的，而有的則能在很短的時(shí)間內(nèi)抑制細(xì)胞生長或殺死細(xì)胞。根據(jù)污染源不同主要可以分為：生物性污染、化學(xué)性污染、物理性污染和氣溶膠污染。
1、生物性污染：
這是常見也是危害大的污染。如細(xì)菌、病毒、真菌，支原體等。這些污染源有可能是人為帶入，或是細(xì)胞在放入二氧化碳培養(yǎng)箱前已經(jīng)受污染，再或者是箱體本身沒有消毒干凈。體外培養(yǎng)的細(xì)胞自身沒有抵抗污染的能力，而培養(yǎng)基中所加抗生素的抗微生物污染的能力也是有限的，因而細(xì)胞微生物污染一旦發(fā)生往往是無法挽救的。
2、化學(xué)性污染：
二氧化碳培養(yǎng)箱中許多化學(xué)物質(zhì)都可以引起細(xì)胞污染。如細(xì)胞培養(yǎng)容器清洗過程中殘留的洗滌劑、加濕器中未純化的水、人為帶入的液體或氣體都可能成為化學(xué)性污染的來源。不同化學(xué)物質(zhì)對(duì)細(xì)胞污染是不一樣的，有的可能促進(jìn)或抑制細(xì)胞生長，有的甚至殺死細(xì)胞。
3、物理性污染：
培養(yǎng)環(huán)境中的物理因素，如溫度、放射線、振動(dòng)、輻射(紫外線或熒光)會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生影響。物理性污染常常被人們所忽視，其主要是在代謝水平或分子水平上，影響細(xì)胞正常的生理過程。
4、氣溶膠污染：
氣溶膠是液體或固體微粒均勻地懸浮在氣體介質(zhì)中的分散體系，當(dāng)微粒是微生物時(shí)，就是微生物氣溶膠，如果這種微生物是病原性的，就是病原微生物氣溶膠。細(xì)菌、病毒等病原體通過氣溶膠可在人與人、人與環(huán)境之間傳播。
二氧化碳培養(yǎng)箱污染防控措施
1、二氧化碳培養(yǎng)箱的選擇：
二氧化碳培養(yǎng)箱的制造商們?cè)O(shè)計(jì)了多種不同的裝置去減少和防止污染的發(fā)生，其主要是防污染設(shè)計(jì)和消毒滅菌系統(tǒng)的改進(jìn)，以達(dá)到消毒滅菌的目的。如帶有紫外消毒功能的二氧化碳培養(yǎng)箱、帶HEPA過濾器凈化空氣的二氧化碳培養(yǎng)箱，以及帶高溫滅菌的二氧化碳培養(yǎng)箱等，后者又分為高溫干熱和高溫濕熱兩類。這些裝置的滅菌能力各有千秋，紫外燈消毒范圍有限，距離燈越遠(yuǎn)，或者被遮擋，消毒能力越差。
HEPA過濾器的過濾膜孔徑有限，無法去除病毒和一些微小細(xì)菌，并且容易損耗，也有其局限性。相比而言，高溫滅菌則是比較有效的方法。而高溫干熱和高溫濕熱也有所不同，不同方法的滅菌效率與溫度的高低也有著直接的關(guān)系。上海潤度生物推出的Herocell系列二氧化碳培養(yǎng)箱可進(jìn)行140℃的高溫干熱滅菌，當(dāng)然也可進(jìn)行90℃的濕熱滅菌，為用戶的滅菌方式提供了豐富的可選擇性。
2、培養(yǎng)工作人員習(xí)慣：
人為因素和態(tài)度可以對(duì)環(huán)境、人和物起到一個(gè)正面或負(fù)面的影響。以安全為目的，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的工作人員應(yīng)明白自身的態(tài)度和人為因素對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境的重要性。因此，對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員進(jìn)行專業(yè)培訓(xùn)對(duì)防污染有著重要作用。
3、重視管理：
細(xì)胞室內(nèi)的二氧化碳培養(yǎng)箱應(yīng)由專人負(fù)責(zé)管理，定期對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行校正，至少每年一次。各項(xiàng)數(shù)值一旦固定后，不要隨意調(diào)節(jié)，以免影響箱內(nèi)溫度、濕度、CO2濃度的波動(dòng)，降低機(jī)器的靈敏度，同時(shí)還會(huì)影響二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)的細(xì)胞生產(chǎn)狀態(tài)。
使用前，對(duì)二氧化碳培養(yǎng)箱的各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行系統(tǒng)校正，并且對(duì)箱體和內(nèi)部進(jìn)行消毒處理，等各項(xiàng)數(shù)值穩(wěn)定一段時(shí)間后方可使用。一旦出現(xiàn)緊急問題，應(yīng)及時(shí)上報(bào)，應(yīng)由專業(yè)的人員進(jìn)行操作，馬上采取應(yīng)對(duì)措施，以免造成不必要的損失。
4、規(guī)范操作：
二氧化碳培養(yǎng)箱的使用雖然很簡單，但同樣需要規(guī)范操作。進(jìn)細(xì)胞室穿著實(shí)驗(yàn)服，換上拖鞋或者穿一次性的鞋套。實(shí)驗(yàn)操作時(shí)帶一次性手套，是打開二氧化碳培養(yǎng)箱前，先用75%的酒精噴壺噴洗雙手再開二氧化碳培養(yǎng)箱，再取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板。顯微鏡下查看細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板后，再放回二氧化碳培養(yǎng)箱時(shí)，同樣也要噴酒精消毒。
二氧化碳培養(yǎng)箱的兩個(gè)門開關(guān)取(放)物要迅速，不可長時(shí)間開著，否則會(huì)影響CO2的濃度、溫度和濕度，以及造成污染。尤其是不要忘了關(guān)好里層的玻璃門。切記開門時(shí)不要對(duì)著二氧化碳培養(yǎng)箱說話，大口呼吸或打噴嚏。
5、加強(qiáng)防護(hù)：
如果實(shí)驗(yàn)人員生病而攜帶病菌，應(yīng)帶上口罩再進(jìn)細(xì)胞室，病情嚴(yán)重的則不宜進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。女性同志實(shí)驗(yàn)時(shí)頭發(fā)應(yīng)梳起，防止皮屑污染及連帶事件的發(fā)生。如果實(shí)驗(yàn)室條件允許，可以每人佩戴實(shí)驗(yàn)帽、手套和口罩，以防污染二氧化碳培養(yǎng)箱及對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的自身的防護(hù)。
6、注重保養(yǎng)：
二氧化碳培養(yǎng)箱置于細(xì)胞室中，室內(nèi)需保持干燥，環(huán)境溫度不能超過30℃(建議保持在18℃-30℃)。二氧化碳培養(yǎng)箱放置在遠(yuǎn)離門窗、供暖設(shè)備和空調(diào)導(dǎo)管的地方，不能被陽光直接照射。二氧化碳培養(yǎng)箱的放置臺(tái)面水平避震且非易燃材質(zhì)，不能靠在墻壁或類似的建筑物上，其后部接電處和墻壁至少保留30cm的空間。一旦放好不宜再移動(dòng)。
7、校正處理：
二氧化碳培養(yǎng)箱在放好后，再對(duì)箱體和內(nèi)部進(jìn)行消毒處理，并且對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行系統(tǒng)校正，等各項(xiàng)數(shù)值穩(wěn)定一段時(shí)間后方可使用。因CO2氣體對(duì)于健康是有害的，因此細(xì)胞室需安裝足夠的通風(fēng)裝置。空氣中的粉塵氣溶膠易造成二氧化碳培養(yǎng)箱的污染，需要一個(gè)流通的空氣環(huán)境。將二氧化碳培養(yǎng)箱的管理任務(wù)分派給有經(jīng)驗(yàn)的檢查人員是重要的。如長期不使用二氧化碳時(shí)，應(yīng)將CO2開關(guān)關(guān)閉，防止CO2調(diào)節(jié)器失靈，避免給實(shí)驗(yàn)室?guī)戆踩允录?/div>
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